TSI AGAR: MANTIK, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

TSI, agar veya üç şeker Demir ağarı olarak hizmet veren bir katı ortam olan bir Gram negatif basillerin ilk kimlik kılavuz biyokimyasal testi. Mevcut şekerlerin fermentasyonunu ve hidrojen sülfür ve gaz üretimini göstermeye dayanır.

Bileşimi ve temeli, Kligler demir testine çok benzerdir, aradaki fark sadece glikoz ve laktoz içerir. Bunun yerine, adından da anlaşılacağı gibi, üçlü şekerli demir agar üç fermente edilebilir karbonhidrat içerir: glikoz, laktoz ve sukroz.

Farklı mikroorganizmalarla TSI testinin görüntüleri A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Kaynak: Witmadrid, Wikimedia Commons'tan

Ek olarak, TSI besiyerinde onu çok besleyici bir agar yapan dört protein türevi vardır: maya ekstresi, et ekstresi, pepton ve proteoz pepton. Ayrıca demirli amonyum sülfat, sodyum tiyosülfat, sodyum klorür, fenol kırmızısı ve agar içerir.

Bir mikroorganizmanın ortamda bulunan glikozu fermente edememesi, onu Enterobacteriaceae Ailesine ait olmaktan hemen çıkarır. Dolayısıyla bu test, cins ve türleri belirlemek için hangi tanımlama yolunun izleneceğine karar vermede önemlidir.

Her laboratuvar TSI agar ile mi yoksa Kligler demir agar ile mi çalışacağına karar verir.

temel

Bileşiklerin her biri ortam içinde bir işlevi yerine getirir.

Sodyum klorür ve agar

Ortamın ozmotik dengesini korumak için sodyum klorür gereklidir. Agar katı kıvam verirken.

PH göstergesi (fenol kırmızısı)

Hazırlanan ortamın pH'ı 7.3'te dengelenir ve pH göstergesi (fenol kırmızısı) 6.8'in altına sarıya döner. Bu, şekerlerin fermantasyonu ile üretilen az miktarda asitin ortamı kırmızı-turuncudan sarıya çevireceği anlamına gelir.

Herhangi bir fermantasyon meydana gelmezse, besiyerinde peptonların kullanılmasıyla kırmızı-turuncudan güçlü kırmızıya dönüşerek alkalileşme olacaktır.

Protein türevleri (maya özütü, et özütü, pepton ve proteoz pepton)

Bakteriler TSI agar'da bulunan proteinleri metabolize ettiğinde, reaksiyon oksijen gerektirdiğinden ortamı alkalileştiren aminler üretilir (esas olarak eğim seviyesinde). Aminler çerçeveyi parlak kırmızıya çevirir.

Ancak bu, bakterinin karbonhidratları fermente edip etmemesine bağlı olacaktır.

Karbonhidratların fermantasyonu (glikoz, laktoz ve sukroz)

Şekerlerin fermantasyonunun incelenmesi birkaç görüntü verebilir ve her biri farklı şekilde yorumlanır. Test yorumu mikroorganizmaları 3 kategoriye ayırır: glukoz fermente etmeyenler, laktoz fermente etmeyenler ve laktoz / sükroz fermentörleri.

Ortamdaki glikoz miktarının sınırlı olduğu, laktoz ve sükroz konsantrasyonunun ise 10 kat daha yüksek olduğu unutulmamalıdır.

Enterobacteriaceae Ailesinin bakterileri ve diğer glikoz fermente eden mikroorganizmalar, enerji için en basit karbonhidrat olduğu için bu şekeri fermente etmeye başlayacaktır.

Öte yandan, laktoz ve sükroz, Embden-Meyerhof döngüsüne girebilmeleri için parçalanması ve glikoza dönüştürülmesi gereken karmaşık karbonhidratlardır.

-Glukoz fermente etmeyen mikroorganizmalar

Aşılanmış mikroorganizma glikozu fermente edemediğinde, çok daha azı diğer karbonhidratları fermente edebilir. Bu nedenle burada asit oluşmaz, ancak peptonların kullanılmasıyla eğimde amin oluşumu olur.

Bu durumda, çerçeve daha güçlü bir kırmızıya döner ve borunun tabanı değişmeden kalabilir veya ayrıca alkalileştirilerek tüm boruyu kırmızı bırakabilir.

Yorum: K / K, alkalin eğim / alkalin veya nötr taban anlamına gelir

Makalenin başındaki resimde tüp D'nin görüntüsüne bakın.

Bu sonuç, mikroorganizmanın Enterobacteriaceae Ailesine ait olmadığını gösterir.

-Laktoz / sukrozu fermente etmeyen mikroorganizmalar

Bakteriler glikozu fermente edebiliyor ancak laktoz veya sukrozu yapamıyorsa, aşağıdakiler gerçekleşecektir:

Bakteriler yaklaşık 6 ila 8 saat sonra mevcut tüm glikozu tüketecek ve hem eğimi hem de bloğu asitleştirebilecektir; yani agar tamamen sarıya dönmüş olacaktır. Ancak glikoz tükendiğinde ve laktoz ve sükroz kullanılamadığında, bakteriler proteinlerin metabolizmasına başlayacaktır.

Bu reaksiyon oksijene ihtiyaç duyar, bu nedenle yüzeyde peptonların bozulması meydana gelir (eğim). Üretilen aminler çerçeveyi sarıdan kırmızıya çevirerek alkalileştirdi. Bu reaksiyon, 18 ila 24 saatlik inkübasyondan sonra kanıtlanır.

Yorum: K / A, alkali eğim ve asit tamponu anlamına gelir.

Makalenin başındaki resimde tüp B'nin görüntüsüne bakın.

-Laktoz / sükroz fermente eden mikroorganizmalar

Laktoz ve sükrozu fermente edebilen mikroorganizmalar açıkça glikozu fermente edebilir. Ortamda bulunan minimum glikoz miktarı tükendikten sonra oluşan piruvat, aerobik Krebs döngüsü yoluyla asit oluşturmak üzere metabolize olmaya başlar ve 8 ila 12 saatlik bir süre içinde tüm ortam sarı olur.

Bakteri laktozu veya sukrozu parçalayabiliyorsa, asitler üretilmeye devam edecek ve 18 ila 24 saat sonra tüm tüp - eğim ve tıpa - sararmaya devam edecektir.

Glikoz kullanımının iki şekilde gerçekleştirildiğine dikkat edilmelidir: biri aerobik olarak tüpün eğiminde, diğeri ise anaerobik olarak tüpün altındadır.

Yorum: A / A, asit eğimi / asit tabanı anlamına gelir. Gaz olabilir veya olmayabilir.

Makalenin başındaki resimde tüp A'nın görüntüsüne bakın.

Gaz üretimi

Bazı mikroorganizmalar, şekerlerin fermantasyonu sırasında gaz üretebilirler. Gaz, tüp içinde agar içinde uyguladığı basınçla kanıtlanır. Basınç, kabarcık oluşumuna veya agarın yer değiştirmesine neden olur. Bazen gaz oluşumu ortamı kırabilir.

TSI besiyerinin ekilmesi sırasında, deliğin agarın merkezinden dibe ulaşana kadar temiz bir şekilde yapılması önemlidir. Delinme, tüpün duvarlarına doğru yönlendirilirse, yanlış oluşturulan kanaldan kaçacağı için gaz üretiminde yanlış pozitiflere neden olabilir.

Agar eğiminde oluşan reaksiyonların yanı sıra gaz üretimi de oksijene ihtiyaç duyar, bu nedenle tüpün pamuklu bir tapa ile kapatılması tavsiye edilir ve Bakalit kapak kullanılıyorsa tamamen sıkılmamalıdır.

Gaz üretimi pozitif (+) veya negatif (-) olarak rapor edilir.

Gaz oluşum modelleri. Kaynak: MSc tarafından yapılan şema. Marielsa Gil. Resim kaynağı: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe, Wikimedia Commons aracılığıyla

Sodyum tiyosülfat ve demirli amonyum sülfat

Hidrojen sülfit (renksiz gaz) üretebilen bakteriler, ortamda bulunan sodyum tiyosülfattan sülfürü alır. H ₂ S oluştuğunda, demirli amonyum sülfat ile reaksiyona girerek demir sülfit (açıkça görülebilen siyah çökelti) üretir.

H ₂ S üretimi pozitif (+) veya negatif (-) olarak rapor edilir.

Makalenin başındaki resimde tüp C'nin görüntüsüne bakın.

Hazırlık

62.5 g kurutulmuş üçlü şekerli demir agar (TSI) ortamını tartın ve bir litre damıtılmış su içinde çözün.

Agar tamamen çözülene kadar ısıtın. Sık sık karıştırarak bir dakika kaynatın. 4 ml besiyerini pamuk kapaklı 13/100 test tüpüne dağıtın.

Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin. Otoklavdan çıkarın ve belli bir açıyla dinlendirin. Hem tabanın hem de çerçevenin aynı mesafeye sahip olmasına dikkat edilmelidir.

2-8 ° C buzdolabında saklayın. Bakteri suşunu ekmeden önce ısınmasını bekleyin.

Susuz ortamın rengi açık bejdir ve hazırlanan ortam kırmızı-turuncudur.

Hazırlanan ortamın nihai pH'ı 7,3 ​​± 0,2'dir.

Uygulamalar

TSI testi, mikrobiyoloji laboratuvarı düzeyinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu test, cinsi ve türleri belirlemek için uygulanması gereken testin türüne rehberlik etmek için gereklidir. İyi uygulaması ve yorumlanması malzeme ve işçilikten tasarruf sağlayabilir.

Sonuç bir TSI K / K ise ve sitokrom oksidaz testi pozitifse, diğer cinslerin yanı sıra Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia gibi fermente olmayan Gram negatif çubukları tanımlamak için testlerin kullanılması gerektiği bilinmektedir. Oksidaz negatif ise, Acinetobacter, Stenotrophomonas, vb. Cinslerine yöneliktir.

Öte yandan bir TSI A / A veya K / A elde edilirse ve sitokrom oksidaz testi negatif ise nitrat nitritlere ne kadar azalırsa Enterobacteriaceae Ailesi'ne ait bir mikroorganizma olduğundan emin olacağız. Bu durumda, tanımlama yolu bu bakteri grubu için özel testlere odaklanacaktır.

Öte yandan, bir K / A veya A / A görüntüsü elde edilirse ve sitokrom oksidaz testi pozitifse, birleştirilecek ek testler, Enterobacteriaceae Ailesine ait olmayan fermente edici suşları belirlemeye yönelik olacaktır, örneğin: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio ve Pasteurella.

Oksidaz negatif hidrojen sülfid içeren bir TSI, Enterobacteriaceae Ailesinin şu cinslerinin tanımlanmasına rehberlik edecektir: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella veya Salmonella.

Alkalin bir arkaplana ve pozitif bir oksidaza sahip alkali eğimde az veya orta derecede hidrojen sülfit içeren bir TSI, Shewanella putrefaciens gibi fermente olmayan H ₂ S üreten Gram-negatif çubukların tanımlanması için testlerin kullanımına rehberlik edecektir .

Son olarak, TSI, özellikle Erysipelothrix rhusiopathiae'den şüphelenildiğinde, Gram pozitif basillerde hidrojen sülfit üretiminin araştırılması için kullanılabilir.

ekilen

TSI besiyeri, birincil veya seçici kültürlerde izole edilmiş saf koloniler ile aşılanmalıdır. Koloni, karışık floraya sahip örneklerle tohumlanmış seçici besiyerinden alınırsa, bu besiyerinde inhibe edilmiş canlı suşlar koloninin alt kısmında mevcut olabileceğinden, yalnızca yüzeyden almaya özen gösterilmelidir.

Bu nedenle öze asla seçici besiyerinde soğutulmamalı ve ardından koloni alınıp TSI ortamı ile aşılanmamalıdır.

Ekim düz ilmek veya iğne ile yapılacaktır. Ortadan dibe ulaşana kadar ortasından geçmesine özen gösterilerek delinecek ve ardından yüzey zikzak şeklinde aşılanarak ekim bitirilecektir. İki kez delmeyin.

37 ° C'de aerobiosis içinde 18-24 saat inkübe edin. Şu anda yorumlayın, ne önce ne de sonra.

Sınırlamalar

TSI testi, inkübasyondan sonraki 18 ila 24 saat içinde okunmalıdır. Bu süreden önceki bir okuma, A / A fermantasyonu için yanlış pozitif verebilir. Oysa bu süreden sonra bir okuma, besiyerini alkalileştiren peptonların tüketimine bağlı olarak fermente olmayanların yanlış negatif görüntüsüne neden olabilir.

Referanslar

1. Mac Faddin J. (2003). Klinik önemi olan bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editör Panamericana. Buenos Aires. Arjantin.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
4. "TSI agar." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 10 Temmuz 2018, 08:09 UTC. 10 Şub 2019, 03:33 Şuradan ulaşılabilir: es.wikipedia.org
5. Britannia Laboratuvarları. TSI Agar (Üçlü şekerli demir agar). 2015. britanialab.com'da bulunabilir
6. BD Laboratuvarları. Üçlü şekerli demir agar (TSI Agar). 2003. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com