PARLAK YEŞIL AGAR: MANTIK, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Parlak yeşil Agar seçicilik yüksek derecede sağlam kültür ortamıdır. Yalnızca Salmonella cinsinin izolasyonu için kullanılır, ancak bu besiyerinde büyümeyen typhi ve paratyphi türleri gibi bazı istisnalar vardır.

Dışkı, su veya yiyecek örneklerinde Salmonella cinsinin araştırılması sıktır. Bu anlamda, bu araç çok faydalı olabilir. Bu agar, 1925'te Kristensen, Lester ve Jurgens tarafından oluşturuldu, daha sonra Kauffmann tarafından değiştirildi.

Parlak yeşil agar. Sırasıyla fermente olan ve olmayan koloniler. Kaynak: MJ Richardson / Invisible Worlds sergisi - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

Hayvan dokusunun peptik sindiriminden ve kazeinin pankreas sindiriminden elde edilen pluripeptonlardan oluşur, ayrıca maya özü, sodyum klorür, laktoz, sukroz, fenol kırmızısı, parlak yeşil ve agar-agar içerir.

Çoğu bakteri için oldukça elverişsiz bir ortam olmasıyla karakterize edilir, Salmonella'nın büyümesini destekler, ancak bazı koliformlar içinde yaşayabilir ve zayıf bir şekilde gelişebilir.

Shigella cinsinin bu besiyerinde büyümediğini ve Salmonella typhimurium ya da Salmonella paratyphi'nin büyümediğini not etmek önemlidir. Bu nedenle, bu mikroorganizmaları izole etmek istiyorsanız, diğerleri arasında XLD agar gibi başka besiyerleri kullanılmalıdır.

temel

Parlak yeşil agar

Besiyerini oluşturan bileşenlerin her biri, agarın özelliklerini ve özelliklerini belirleyen belirli bir işlevi yerine getirir.

Pluripeptonlar ve maya özütü, mikroorganizmaların gelişmeleri için gerekli olan nitrojen ve mineralleri aldıkları besinlerin kaynağıdır. Laktoz ve sükroz, onları fermente edebilen mikroorganizmalar için enerji kaynaklarıdır.

Parlak yeşil, Gram pozitif bakterilerin ve çok sayıda Gram negatif mikroorganizmanın büyümesini engelleyen inhibe edici maddedir.

Sodyum klorür, ortama ozmotik stabilite sağlar. Fenol kırmızısı pH indikatörü iken karbonhidrat fermantasyonundan asit üretimi tespit edildiğinde renk değiştirir.

Fermente olmayan laktoz ve sükroz kolonileri bu besiyerinde kırmızı bir arka plan üzerinde pembemsi veya şeffaf beyaz renkte büyür. Örneğin, Salmonella cinsi bakteriler.

Bu besiyerinde üreyebilen laktoz veya sükroz fermente eden bakteriler, yeşilimsi sarı zemin üzerinde sarı-yeşil veya sarı-yeşil koloniler geliştirir. Örneğin, Escherichia coli ve Klebsiella pneumoniae.

Parlak yeşil agar (BGA) çeşitleri

Parlak yeşil agarın başka çeşitleri de vardır; Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) Agar ve Novobiocin Brilliant Green Glycerol Laktoz (NBGL) Agar.

Novobiocin Bright Green Glucose Agar

Triptikaz Soy Agar, Ferrik Amonyum Sitrat, Sodyum Tiyosülfat Pentahidrat, Fenol Kırmızısı, Glikoz, Parlak Yeşil, Novobiocin ve Distile Su içerir.

Dışkı örneklerinden Salmonella kolonilerinin izolasyonu için kullanılır.

Bu durumda parlak yeşil ve novobiosin, Gram pozitif bakterilerin ve bazı Gram negatif mikroorganizmaların büyümesini engelleyen inhibe edici maddelerdir.

Sodyum tiyosülfat sülfit kaynağıdır ve ferrik sitrat, her ikisi de siyah bir ferrik sülfür çökeltisinin oluşumu yoluyla hidrojen sülfit üretimini ortaya çıkarmak için gerekli olan demir kaynağıdır.

Glikoz fermente olabilen karbonhidrattır ve fenol kırmızısı pH göstergesidir.

Bu besiyerinde, Salmonella kolonileri, kırmızımsı bir hale ile çevrelenmiş siyah bir merkezle ve ardından net bir görülebilir alanla büyük gelişir. Bazı Citrobacter freundii türleri, Salmonella'nınkine benzer koloniler üretir.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Laktoz Agarı (NBGL)

Bu besiyeri, triptikaz soya agar, ferrik amonyum sitrat, sodyum tiyosülfat, laktoz, gliserol, parlak yeşil, novobiosin ve damıtılmış su içerir.

Bu besiyerinden öncekiyle arasındaki fark, glikozun laktoz ve gliserol ile ikame edilmesi ve fenol kırmızısının kullanılmamasıdır.

Besiyeri ayrıca Salmonella türlerini izole etmek için de kullanılır, koloniler hidrojen sülfit üretimi nedeniyle siyahlaşır.

Yalnızca gliserol veya laktozdan asit üretmeyen koloniler yeterli H ₂ S üretimine ulaşır çünkü düşük pH H ₂ S oluşumunu engeller.Bu, çoğu tür için renksiz kolonilerle sonuçlanır. Proteus ve Citrobacter.

Hazırlık

- Ticari olarak elde edilen susuz ortamın 58 gramını tartın. Bir litre yeniden damıtılmış suya ekleyin. Karıştırın, birkaç dakika bekletin ve karışımı tamamen eriyene kadar bir ısı kaynağına koyun.

-121 ° C'de 15 dakika otoklavlayın, sterilizasyon süresini aşmayın.

-Serbest Petri kaplarında sıcakken dinlendirin ve servis yapın. Nihai pH 6,9 ± 0,2 olmalıdır.

-Kullanılana kadar katılaşıp buzdolabında saklayın. Ekimden önce plakalar oda sıcaklığında olmalıdır.

-Pudra ortamı yeşil renktedir ve pH'a ve ticari firmaya bağlı olarak turuncu-kahverengi veya kırmızımsı-yeşil renk alır. Çok kahverengi bir renk, agarın aşırı ısındığını gösterir.

-Ağar katılaştıktan sonra, besiyeri bozulduğu için yeniden şekillendirilmesi önerilmez.

Kullanımlar / uygulamalar

Bu besiyeri, diğerlerinin yanı sıra dışkı örneklerinden ve süt ürünlerinden Salmonella cinsi suşlarını aramak için kullanılır.

Oldukça elverişsiz bir ortam olduğu için, doğrudan örnek kullanılıyorsa bol miktarda aşı ekilmesi tavsiye edilir. Aksi takdirde, bu besiyerinde ekimden önce numunelerin ön zenginleştirilmesi ve zenginleştirilmesi yapılmalıdır.

Bazı Salmonella suşları inhibe edildiğinden veya güçlükle büyüdüğünden, bu besiyerine Salmonella için diğer seçici agar ile eşlik edilmesi önerilir.

Tipik bir Salmonella karakteristiğine sahip her koloni, kesin tanımlanması için biyokimyasal testlere tabi tutulmalıdır.

QA

Parlak yeşil agar besiyerinin iyi performansını test etmek için, ATCC suşları bunun üzerindeki gelişimlerini gözlemlemek için kullanılabilir.

Kalite kontrol için en sık kullanılan suşlar şunlardır: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 65.

İlk 3, kırmızı zemin üzerine pembemsi veya şeffaf beyaz koloniler vermelidir. İyi gelişme gösteren Salmonella ve az veya düzenli gelişim gösteren Proteus.

Klebsiella ve Escherichia için, sarı arka plana sahip sarı-yeşil koloniler beklenir ve Shigella ve Staphylococcus söz konusu olduğunda bunlar inhibe edilmelidir.

Susuz ortam oda sıcaklığında kuru bir yerde saklanmalıdır çünkü ortam çok higroskopiktir.

Referanslar

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Brilliant Green Agar. 2009
2. Britannia Laboratuvarı. Bright Green Agar. 2015.
3. BD Laboratuvarı. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. (5. baskı). Arjantin, Editoryal Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Arjantin. Editoryal Panamericana SA