XLD AGAR: MANTIK, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

XLD agar agar ortamında veya ksiloz Lizin desoksikolat enteropathogens izolasyonu için seçici ve diferansiyel bir katı kültürdür. Taylor, Shigella cinsinin izolasyonunu iyileştirmek için XL agar (Xylose, Lysine) formülünü tasarladı.

Bu cinsin, enteropatojenlerin izolasyonu için amaçlanan çoğu ortamda engellendiğini gözlemledi. Ardından, seçiciliğini artırmak için sodyum deoksikolat, sodyum tiyosülfat ve ferrik amonyum sitrat ilave edildi. Bu formülün hem Shigella hem de Salmonella izolasyonu için yararlı olduğu kanıtlanmıştır.

XLD agarda Shigella, Salmonella ve koliform kolonilerinin farklılıkları. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Kaynaklar: A. Yazan: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, Nezaket: Halk Sağlığı Resim Kitaplığı B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Yazan: CDC / Dr. JJ çiftçi, Nezaket: Halk Sağlığı İmaj Kütüphanesi

XLD agar, maya özütü, sodyum deoksikolat, ksiloz, lisin, laktoz, sukroz, sodyum tiyosülfat, ferrik amonyum sitrat, sodyum klorür, fenol kırmızısı ve agardan oluşur. XLD Agar ve SS Agar ikilisi, çoğu bakteriyoloji laboratuarında Shigella ve Salmonella için dışkı örneklerini incelemek için kullanılır.

Diğer laboratuvarlar, diğer mevcut seçenekler arasında CHROMagar Salmonella ve XLD agar kombinasyonunu tercih eder. Bu ikililer ikili Petri kaplarında hazırlanabilir. Bir tarafa XLD agar ve diğer tarafa seçilen besiyerini yerleştirirler.

temel

Besleyici güç

XLD agar, bu agarda büyüyen mikroorganizmalar için bir besin kaynağı görevi gören maya özütüne sahiptir. Ek olarak, karbonhidratların (ksiloz, sukroz ve laktoz) varlığı, onları fermente edebilen bakterilere enerji sağlar.

Ortamın seçiciliği

Engelleyici bir madde olarak sodyum deoksikolat sunar; Bu, Gram pozitif bakterilerin büyümesini engelleyerek ortama seçici bir karakter kazandırır.

-Farklı güç

Tipik Shigella kolonileri

Daha önce belirtildiği gibi, XLD agar ksiloz içerir; Bu karbonhidrat, Shigella cinsi dışında bu besiyerinde büyüyen tüm bakteriler tarafından fermente edilir.

Bu, ona farklı karakterini veren özelliklerden biridir, çünkü Shigella kolonileri diğerlerinden kırmızı koloniler geliştirerek ayırt edilirken, diğer bakteriler sarı koloniler oluşturur.

Tipik Salmonella kolonileri

Salmonella cinsi ayrıca ksilozu fermente ederek başlangıçta sarı koloniler oluşturur. Bununla birlikte, karbonhidrat ksilozu tükendikten sonra, enzim lizin dekarboksilaz için lizine saldırır. Lizinin dekarboksilasyonu, koloninin ve çevreleyen ortamın rengini orijinal kırmızıya çeviren alkaliler oluşturur.

Lizini dekarboksilatlayan koliformlar besiyerini alkalileştiremediğinden, bu davranış yalnızca Salmonella tarafından gerçekleştirilir. Bunun nedeni, koliformların ayrıca mevcut laktozu ve sükrozu da fermente etmesidir; bu nedenle asit üretimi çok yüksektir ve bu bakterilerde sarı koloniyi bırakır.

Salmonella cinsinin sükroz veya laktozu fermente etmediğine dikkat edilmelidir.

H üretimi

XLD agar aynı zamanda H algılanmasını sağlar ₂ S- üreten Salmonella türleri ; Bunun için, sodyum tiyosülfat ile temsil edilen kükürt kaynağına ve ferrik amonyum sitrat olan bir reaksiyon geliştiricisine dayanır.

Sonuncusu H ₂ S (renksiz gaz) ile reaksiyona girer ve görünür, çözünmez siyah bir demir sülfat çökeltisi oluşturur. Bu anlamda, salmonella kolonilerinin özellikleri kırmızı ve merkezi siyah olacaktır.

H ₂ S oluşum reaksiyonunun meydana gelmesi için alkali bir pH'a ihtiyaç olduğu unutulmamalıdır . Bu nedenle diğer Enterobacteriaceae form H ₂ S girmez ya da karbonhidrat mevcut inhibe ya da engel olması olarak, reaksiyon fermante ederek üretilmiş yüksek asidite, çünkü bu ortamda çok zayıf yok.

-Sodyum klorür, agar ve fenol kırmızısı

Son olarak, sodyum klorür ozmotik dengeyi korur; agar katılaştırıcı ajandır ve fenol kırmızısı pH değişikliklerini tespit ederek kolonilerin ve besiyerinin rengini değiştirir.

Hazırlık

55 g kurutulmuş XLD besiyerini tartın ve 1 litre suda çözün. Karışımı kaynama noktasına gelene kadar ısıtın ve karıştırın. Isı ortama zarar verdiği ve tipik kolonilerin morfolojisini değiştiren bir çökelti oluşturduğu için aşırı ısıtmayın.

Bu besiyeri otoklavlanmamalıdır. Çözülürken 50 ° C'de su banyosuna geçirilmelidir. Soğutulduğunda doğrudan steril Petri kaplarına servis edilmelidir. Tek tabak veya çift tabak içine dökülebilirler. Katılaşmaya bırakılır ve kullanıma kadar buzdolabında saklanır.

Kullanmadan önce temperleyin. Steril olmayan bir besiyeri olduğu için kullanım tarihine yakın hazırlanması tavsiye edilir.

Ortamın son pH'ı 7,4 ± 0,2 olmalıdır. Hazırlanan besiyerinin rengi çökelti içermeyen turuncu-kırmızı yarı saydamdır.

Xylose Lysine (XL) bazlı agarınız varsa, sodyum deoksikolat, sodyum tiyosülfat ve demir amonyum sitrat ekleyebilirsiniz. Bu şekilde XLD agar formülü elde edilir.

Uygulamalar

XLD agar, enteropatojenlerin, özellikle Shigella cinsi ve ikincil olarak Salmonella cinsinin geri kazanımı için kullanılır. Dışkı, su ve yiyecek örneklerinin değerlendirilmesinde faydalıdır.

Örnek türleri

Dışkı

Dışkı örnekleri doğrudan XLD agar üzerine ekilebilir, bu da izole koloniler elde etmek için materyalin iyi bir dağılımını sağlar.

Salmonella iyileşmesini iyileştirmek için XLD agar, Salmonella zenginleştirme besiyerinden sürme yöntemi ile ekilebilir.

Gıda

Yemek olması durumunda, Salmonella ve Shigella için zenginleştirici et suları kullanılabilir. Salmonella için diğerleri arasında selenit sistin suyu, parlak yeşil tetratiyonat et suyu kullanabilirsiniz.

Shigella söz konusu olduğunda, 16-20 saat 42 ° ± 1 ° C'de inkübe edilmiş 0,5 µ / ml novobiosin içeren Shigella broth ile zenginleştirilebilir.

Su

Su analizinde, diğerlerinin yanı sıra membran filtrasyon tekniği ve XLD agar kullanımı önerilir.

Dikim ve tanımlama koşulları

Tohumlanan besiyeri aerobik olarak 35 ° C'de 24 ila 48 saat inkübe edilir.

Her cinsin tipik kolonileri gözlemlenir, şüpheli koloniler tanımlanmaları için biyokimyasal testlere tabi tutulmalıdır.

QA

Besiyerinin kalite kontrolünü değerlendirmek için aşağıdaki bakteri suşları kullanılabilir: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 4 Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Salmonella cinsi, bu besiyerinde siyah merkezli kırmızı koloniler veya tamamen siyah koloniler sunması ile karakterize edilir. Oysa Shigella cinsinde koloniler kırmızı, yani besiyerinin rengi olmalıdır.

Escherichia coli durumunda, tamamen veya kısmen inhibe olması beklenir; büyürse koloniler sarıdır. Proteus mirabilis için, siyah merkezi olan veya olmayan pembe kolonilerde zayıf büyüme beklenir. Sonunda Klebsiella cinsi sarı koloniler halinde büyüyecektir.

Son düşünceler

XLD agar, Shigella'nın geri kazanılması için yüksek etkinliği nedeniyle bakteriyoloji laboratuvarlarında yaygın olarak kullanılmaktadır ve ayrıca Salmonella cinsi için iyi bir geri kazanıma sahiptir.

Rall ve diğerleri (2005) "Kanatlı hayvanlarda Salmonella tespiti için üç zenginleştirme brothu ve beş katı besiyerinin değerlendirilmesi" başlıklı çalışmalarında test edilen 3 klasik besiyerinin (parlak yeşil agar, SS agar ve XLD agar) olduğunu göstermiştir. XLD agar en iyi iyileşme oranına sahipti.

Geri kazanım yüzdeleri şu şekildedir: parlak yeşil agar için% 13.8, SS için% 27.6 ve XLD için% 34.5. % 48 geri kazanıma sahip Rambach agar ve% 79.3 ile CHROMagar sadece kromojenik besiyeri tarafından aşıldı.

Referanslar

1. Gıda kaynaklı hastalıklar. Şigelloz. Şu adresten ulaşılabilir: anmat.gov.ar
2. "XLD agar." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 9 Şubat 2019, 11:46 UTC. 10 Nis 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL Laboratuvarları. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (çift plakalı). 2013 Mevcut: bd.com
4. Lab Neogen. XLD agar. Bulunduğu yer: foodafety.neogen
5. Francisco Soria Melguizo Laboratuvarı. XLD Agar. Mevcut: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M.Kümes hayvanlarında Salmonella tespiti için üç zenginleştirme suyu ve beş kaplama ortamının değerlendirilmesi. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Kullanılabilir: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.