PEPTON SUYU: MANTIK, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Pepton su ağırlıklı olarak seyreltici gıda örnekleri ya da diğer malzeme olarak kullanılan seçici olmayan sıvı bir zenginleştirme ortamı vardır. Kimyasal açıdan bu ortam çok basittir, et peptonu, sodyum klorür ve su içerir.

Numuneyi zenginleştirmeye izin veren belirli bir besin değerine sahiptir. Kötüye kullanılan bakteri varsa, bu ortam canlılığı onarma gücüne sahiptir. Özellikle Enterobacteriaceae familyasına ait bakterilerin geri kazanılmasında faydalıdır.

Şişelerde pepton suyu. Kaynak: MSc. Marielsa Gil

Salmonella'nın geri kazanılması durumunda, şişirilmiş pepton su varyantının kullanılması önerilir; Bu, numune için bir ön zenginleştirme ortamı görevi görür, bu durumda disodyum fosfat ve dipotasyum fosfat gibi diğer elementleri içerir.

Normalde pepton suyu nötr pH'ta hazırlanır, ancak pH'ın 8.5 ± 0.2 (alkali) olması gereken başka varyantlar da vardır, çünkü izole edilecek bakteriler alkalifiliktir. Vibrio cholerae.

Ayrıca bu ortam, karbonhidrat fermentasyon testleri için bir temel ortam olarak kullanılabilir.

temel

Peptonlar, bakteriyel büyüme için gerekli besinleri, özellikle azot ve kısa zincirli amino asitleri sağlarken, sodyum klorür ozmotik dengeyi korur.

Ayrıca ortam, endüstriyel işlemlerle hasar görmüş bakteri hücrelerinin dağıtılmasını, homojenleştirilmesini ve onarılmasını mümkün kılar.

Seyreltici olarak ideal, fizyolojik solüsyonun (SSF) veya fosfat tampon solüsyonunun (PBS) yerini etkili bir şekilde değiştirir.

Bakteriyel büyüme, bulanıklığını gözlemleyerek belirgindir.

Hazırlık

Ev yapımı hazırlık (ticari değil)

1 gr pepton ve 8,5 gr sodyum klorür tartılır, 1 litre distile suda çözülür. PH 7.0'a ayarlanmalıdır. Bunun için 1N sodyum klorür kullanılabilir.

Ticari ortam kullanarak hazırlama

15 g susuz ortam tartılır ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. Karışımı homojenize edin. Gerekirse karışım 1 dakika kaynatılır ve toplam çözünmeye yardımcı olur. Gerektiğinde 100 ml'lik şişelerde veya 10 ml'lik tüplerde servis yapın. 121 ° C'de 15 dakika otoklavlayın.

Soğutun ve buzdolabında kullanın veya saklayın. Ortamın nihai pH'ı 7.2 ± 0.2'dir.

Susuz ortamın rengi açık bejdir ve hazırlanan ortam açık kehribar rengidir.

Fermantasyon testleri için hazırlık

Önceki preparasyona - sterilizasyondan önce - karbonhidrat nihai% 1 konsantrasyona ek olarak Andrade indikatörü (asit fuksin) veya fenol kırmızısı (0.018 g / L) eklenmelidir. Gaz oluşumunu gözlemlemek için tüplere bir Durham çanı takılmalıdır.

Pepton suyunun diğer çeşitleri

Tamponlanmış veya tamponlanmış pepton suyu

Kazein enzimatik hidrolizatı, sodyum klorür, dihidrojen potasyum fosfat ve sodyum hidrojen fosfat dodekahidrat içerir. Nihai pH 7.0 ± 0.2'dir.

Hazırlanması için 20 g susuz ortam tartılır ve 1 litre damıtılmış su içinde çözülür. Yaklaşık 5 dakika dinlendirin. Tamamen eriyene kadar 1 dakika ısıtın.

Gerektiği kadar uygun kavanozlara dökün. Otoklav kullanarak 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin.

-Alkalin pepton suyu

25 g susuz ortam tartılır ve 1 litre su içinde çözülür. Yukarıda açıklandığı gibi devam edin. PH, 8.3 ile 8.7 arasında değişir.

kullanım

Aşılama, numunenin doğrudan yerleştirilmesiyle yapılır.

Özellikle zarar görmüş bakteri olabileceğinden şüphelenildiğinde numuneleri seyreltmek için kullanılır. Genellikle dilüsyonlar 1:10 ve 1: 100'dür.

35-37 ° C'de aerobiosis içinde 24 saat inkübe edin.

Dışkı örnekleri

Salmonella dışkı örnekleri için, ön zenginleştirme besiyeri olarak tamponlu veya tamponlu su kullanılması önerilir.

Bunu yapmak için aşağıdaki işlemleri yapın:

Dışkı oluşmuşsa 1 g numune alın. Sıvı iseler 1 ml dışkı alın ve 10 ml perdahlanmış pepton su içeren bir tüpte süspanse edin. Rektal sürüntü olması durumunda, sürüntü içinde bulunan malzemeyi tamponlu peptonlu su ile tüpe boşaltın.

Her durumda, numuneyi çok iyi karıştırın ve homojenize edin.

37 ° C'de 18 ila 24 saat inkübe edin. Daha sonra selenit sistin çorbası veya tetratiyonat çorbası gibi bir zenginleştirme çorbasında 37 ° C'de 18-24 saat daha fazla alt kültür yapın. Son olarak, diğerleri arasında SS agar, XLD agar, Hektoen agar gibi Salmonella için seçici besiyerinde kültivasyon yapın.

Gıda örnekleri

Pepton suyu, bir zenginleştirme ortamı veya basit bir seyreltici olarak kullanılır, ancak Salmonella türleri aranırsa, daha önce açıklandığı gibi bir ön zenginleştirme ortamı olarak kullanılır.

Yiyeceklerde şu şekilde hareket edin:

Katı yiyecekler için 25 g numune ağırlığında ve sıvı yiyecekler için 25 ml ölçülür. Bahsedilen kısmı 225 ml pepton su içeren şişelere koyun. Örneği karıştırın ve homojenize edin.

Mikrobiyal yükün yüksek olduğundan şüpheleniliyorsa, koloni oluşturan birimlerin (CFU) sayılmasını kolaylaştırmak için seri veya ondalık dilüsyonlar yapılabilir.

Seyreltme sayısı, numune tipine ve analistin deneyimine bağlı olacaktır.

Aksine, mikrobiyal yükün çok düşük olduğundan şüpheleniliyorsa, seyreltme yapılması gerekli değildir. Daha sonra, seçici ortamda alt kültür.

Deniz kabukluları, balıklar gibi diğer yiyeceklerin yanı sıra Vibrio cholerae veya diğer Vibrio türlerinin araştırılması için pH 8,5'e ayarlanmış pepton suyu (alkali pepton suyu) kullanılmalıdır.

QA

Hazırlanan her partiden bir ila iki tüp 37 ° C'de aerobiosis içinde 24 saat inokülasyon yapılmadan inkübe edilmelidir. Süre sonunda bulanıklık veya renk değişikliği gözlenmemelidir.

Bilinen kontrol suşları, etkinliklerini değerlendirmek için de kullanılabilir:

Bunun için aşağıdaki bakteri suşları kullanılabilir: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Tüm durumlarda, besiyerinin türbiditesiyle gözlenen tatmin edici bir mikrobiyal gelişme beklenir.

Sınırlamalar

- Susuz ortam çok higroskopiktir, bu nedenle nemden uzak tutulmalıdır.

-Herhangi bir bozulma gözlenirse ortam kullanılmamalıdır.

- Susuz kültür ortamı 10 - 35 ° C arasında saklanmalıdır.

-Hazırlanan besiyeri buzdolabında (2-8 ° C) tutulmalıdır.

Referanslar

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ve Velázquez O. Gıdaların Mikrobiyolojik Analizi için Teknikler. 2009, 2. baskı. Kimya Fakültesi, UNAM. Meksika. Kimya Fakültesi, UNAM Kılavuzları ve Doküman Yöneticisi (AMyD) için Sürüm 1. Şu adresten ulaşılabilir: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratuvarları. Buffeted pepton suyu. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
3. Neogen Laboratuvarları. Pepton suyu. Bulunduğu yer: foodafety.neogen.com
4. Britannia Laboratuvarları. Pepton suyu. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
5. Merck Laboratuvarları. Tamponlanmış pepton suyu. Merckmillipore.com adresinde mevcuttur
6. Conda Pronadisa Laboratuvarları. Alkali pepton suyu. Condalab.com'da mevcuttur
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.