BAKTERIYEL KÜLTÜR: TÜRLERI, ÖZELLIKLERI, YÖNTEMLERI, GEREKSINIMLERI - BIYOLOJI - 2025

Bir bakteri kültürü , bu mikroorganizmaların çoğalmaları için besleyici ortam üzerine tohumlanmasının bir sonucudur ve katı ortamda bakteri kolonilerinin görünmesine ve sıvı ortamda bulanıklığa neden olur.

Ekim yöntemi, aşıyı mevcut bakterilerin dağılacağı ve uygun şekilde izole edilmiş koloniler geliştirebilecek şekilde dağıtabilmek için çok önemlidir.

Yazar tarafından Carabobo Üniversitesi Biyomedikal ve Teknolojik Bilimler Binasının Bakteriyoloji Laboratuvarı'na ekilen çeşitli ürünler. Kaynak: Yazar MSc tarafından çekilmiş fotoğrafların kompozisyonu. Marielsa Gil.

Katı kültür ortamında elde edilen koloniler, tohumlanan mikroorganizmanın çoğalmasının bir sonucudur. Her koloni, makroskopik olarak görülebilen bir popülasyon oluşturmak için üstel olarak çoğalabilen tek bir bakteriden başlar.

Aynısı sıvı kültür ortamında da meydana gelir, ancak bu durumda bakteri üremesi bulanıklıkla gözlenir.

Bakteriyel büyüme, seçilen kültür ortamı belirli bir bakterinin gelişimi için gerekli beslenme ve pH koşullarını karşıladığında mümkündür. Ek olarak, diğer değişkenlerin yanı sıra sıcaklık, inkübasyon süresi, oksijen konsantrasyonu, CO ₂ gibi diğer değişkenleri kontrol etmek gerekir .

Tüm bakteri popülasyonları aynı gerekliliklere ihtiyaç duymaz, ancak bazıları besiyerinin pepton içermesi gibi hemen hemen herkes için ortak olabilir, ayrıca büyüme faktörleri adı verilen diğer spesifik maddelere ek olarak ihtiyaç duyan daha zorlu mikroorganizmalar olduğu da doğrudur.

Örneğin, bazı Haemophilusların büyümek için faktör X (hemin) ve faktör V (NAD) varlığına ihtiyaç duyduğu söylenebilir.

Bakteriyel kültür türleri

Bakteriyel kültürler polimikrobiyal, saf veya karışık olabilir.

Polimikrobiyal bakteri kültürleri

Polimikrobiyal kültürler, belirli bir patojenin de bulunabileceği normal bir mikrobiyotaya sahip bir yerden elde edilen bir örneğin ekilmesiyle elde edilen kültürlerdir.

Örnek: Bir boğaz sürüntü kültürü geliştirirken, Streptococcus pyogenes gibi bir patojen bulunabilir, ancak bu bölgedeki ortak bir mikrobiyota eşlik edecektir.

Bu durumda, izolasyonda bulunan farklı bakteri türlerinin büyümesine izin vermek için iyi bir çizgi çizme şarttır.

Streptococcus pyogenes suşu ile uyumlu özelliklere sahip olan koloni, platin öze ile dikkatlice dokunulacak ve daha sonra bakire bir kültür ortamına ekilecek ve böylece bu mikroorganizmanın saf bir kültürünü elde edilecektir.

Bu saf kültürden, bakterileri tanımlamak için gereken tüm testler gerçekleştirilebilir.

Saf bakteri kültürü

Bir mikroorganizmayı verimli bir şekilde tanımlamak için, kişinin saf bir kültürden çalışması gerekir.

Saf kültürler, önceki örnekte olduğu gibi, izole edilmiş bir polimikrobiyal kültür kolonisinin yeniden dikilmesiyle veya normalde steril bir yerden gelen bir numune ekildiğinde ve yalnızca bir patojen mevcut olduğunda (tek bir bakteri türü). Örnek: Bakteriyel menenjitli bir hastadan CSF tohumlandığında.

Başka bir yol da, yenilenmiş saf bir kültür elde etmek için eski bir saf kültürden yeniden tohumlama yapmaktır.

Karışık bakteri kültürleri

Bu kültürler, doğada oluştukları için bir mikroorganizma karışımından oluşur. Bazı endüstriyel süreçlerde karışık kültürlerin kullanımı uygundur.

Birkaç saf kültürün birleşmesi yoluyla elde edilebilir, çünkü bunlar bakteriyel karşılıklı ilişkilerin incelenmesine izin verir.

Örneğin, biyolojik olarak parçalanabilen ajanlar olarak hareket ettikleri için endüstriyel atık sudaki ksenobiyotiklerin bozunmasında faydalıdırlar.

Bakteri kültürlerinin özellikleri

Bakteri kültürlerinde elde edilen kolonilerin morfolojik özellikleri çok çeşitli olabilir.

Koloniler çok küçük, orta veya büyük olabilir ve kuru veya mukoid, parlak veya donuk görünebilir. Dokuya bağlı olarak pürüzsüz ve pürüzlü arasında değişebilir ve şekle bağlı olarak dairesel, düz, dışbükey olabilirler.

Renge bağlı olarak, ilgili bakteriye ve kullanılan kültür ortamına bağlı olarak renksiz, beyaz, sarı, pembe, fuşya, kırmızı, turuncu, bej, grimsi, yeşilimsi, kahverengi, siyah veya metalik bir parlaklık olabilir.

Kolonilerin sınırları düzenli veya düzensiz olabilir. Diğerleri ise, "kümelenme" adı verilen neredeyse tüm ortama dağıtılan tek tip bir film sunabilir. Bu, Proteus sp.

Bazı bakteri kültürleri, ilgili türlerin oldukça karakteristik özelliği olan kokular yayar. Örneğin, bir Pseudomonas aeruginosa kültürü karakteristik bir meyve kokusuna sahipken, Proteus cinsi karakteristik olarak çürük bir kokuya sahiptir.

Boyutlarına göre koloni örnekleri

Son derece küçük: Mycoplasma pneumoniae, Francisella tularensis.

Küçük: Streptococcus sp, Enterococcus sp.

Orta: Family Enterobacteriaceae

Büyük: Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa.

Görünüşlerine göre koloni örnekleri

Kuru: Lactobacillus confusus.

Mukoidler: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.

Parlak: Klebsiella pneumoniae.

Opak: Enterococcus faecalis, bazı Neisseria gonorrhoeae türleri.

Yapılarına göre koloni örnekleri

Düzgün koloniler: Micrococcus luteus

Kaba koloniler: Besleyici agarda Sarcina ventriculi.

Şekillerine göre koloni örnekleri

Genelgeler: Besleyici agarda Listeria murrayi ve Micrococcus luteus.

Düz: Besleyici agarda Staphylococcus equorum.

Dışbükey: Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae.

Sınırlarına göre koloni örnekleri

Yuvarlak kenar: Staphylococcus aureus, Escherichia coli.

Düzensiz sınır: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.

Loblu kenarlar: Bacillus sp.

Renklerine göre koloni örnekleri

Şeffaf veya renksiz: XLD agarda Shigella türü.

Beyaz: Kanlı agarda Staphylococcus hominis.

Bej: Bacillus sphaericus ve Lactobacillus confusus besleyici agar üzerinde.

Sarı: Kanlı agarda Staphylococcus aureus ve Elizabethkingia meningoseptica, besleyici agarda Pediococcus sp, Staphylococcus lentus,

Pembe: XLD agarda Escherichia coli, besleyici agarda Micrococcus roseus.

Fuşya: Mac Conkey agarda Escherichia coli.

Menekşe: Chromobacterium violaceum.

Kırmızımsı: Agar besleyici üzerinde oda sıcaklığında Serratia marcescens.

Turuncu: Kurthia zopfii besleyici agar üzerinde.

Grimsi: Sporosarcina ureae toprak özütü agarda.

Yeşilimsi: BHI agarda Pseudomonas aeruginosa.

Kahverengi: Safra eskülin agarda Enterococcus sp.

Siyah: SS agar üzerinde Salmonella enteritidis.

Metalik parlaklık ile: Endo agar üzerinde Escherichia coli.

Bakteriyel kültür yöntemleri

Fakültatif aerobik veya anaerobik bakteri kültürü

En çok kullanılan yetiştirme yöntemidir. Bunun nedeni, ilk olarak, insanlar için patojen olan bakterilerin çoğunun aerobik veya fakültatif anaerobik olmasıdır; ikincisi, anaerobik kültürlerden çok daha ucuz ve kolaydır. Örnek: Sırasıyla Mycoplasma pneumoniae ve Escherichia coli.

Anaerobik bakteri kültürü

Bu tür bir kültür, tam oksijen baskılaması gerektirir. Anaerobik bakteriler için kültür ortamı, havadaki oksijenin toksik etkilerini ortadan kaldırmak için genellikle askorbik asit, tiyoglikolat, sistein veya sülfür gibi indirgeyici maddeler içermelidir.

Bazıları, oksijen varlığında mavi, anaerobiyozda renksiz olan resazurin gibi göstergeler içerir. Örnek: Clostridium tetani.

Mikroaerofilide bakteri kültürü

Kültür plakaları, üzeri yanan bir mum ile mikroaerofilik bir başlığa yerleştirilir. Mum oksijeni tüketir ve söner. Bu durumda, Streptococcus sp.

Malzemeler ve gereksinimler

malzemeler

Bir bakteri kültürü gerçekleştirmek için gerekli malzemeler şunlardır: Petri kapları veya kültür ortamı veya et suyu içeren tüpler, platin halka, numune, Bunsen brülörü veya fırın.

Bir bakteri kültürü gerçekleştirme gereksinimleri

Bakteri kültürü, diğerlerinin yanı sıra ortamdaki besinler, pH, sıcaklık, oksijen konsantrasyonu, CO2, nem gibi dikkate alınması gereken birçok unsuru gerektirir.

Besinler

Bakteriyel kültürler, makro elementler ve mikro elementler içeren kültür ortamına ihtiyaç duyar. Makro elementler arasında karbon ve nitrojen kaynağı olarak peptonlar, amino asitler, karbonhidratlar gibi organik maddeler sayılabilir.

Mikro elementler arasında inorganik maddeler veya eser elementler manganez, çinko, nikel, bor, klor, selenyum, silikon, kobalt, bakır ve diğerleri bulunur.

Hidrojen iyon konsantrasyonu (pH)

Kültürün gelişeceği ortamdaki hidrojen iyonları (H ⁺ ) ve hidroksil iyonlarının (OH ^- ) konsantrasyonu , pH'ı belirledikleri için hayati öneme sahiptir.

En yaygın olarak kullanılan pH nötrdür (pH = 7.0), ancak asidik veya alkali pH'ın uygun olduğu yollar olabilir, örneğin sırasıyla bir asidofilik veya alkalifofilik bakteriyi izole etmek istiyorsanız.

Sıcaklık

Sıcaklık, bakteri kültürlerinin büyümesini etkileyen çok önemli bir faktördür. Bakteriler psikrofilik (<20 ° C sıcaklıklarda büyür, mezofilik (20 ° C ile 42 ° C arasında), termofilik (40 ° C ila 70 ° C), hipertermofilik (70 ° C - 105 ° C) olabilir.

Oksijen ihtiyacı

Aerobik: Oksijen varlığında büyürler.

Mikroaerofilik:% 5-10 CO ₂ varlığında büyürler _.

Katı anaeroblar: Oksijen yokluğunda büyür.

Fakültatif anaeroblar: oksijen varlığında veya oksijen olmadan büyür.

Aerotolerant: Oksijen olmadan iyi büyürler ve çok az oksijene tolerans gösterirler.

Kültür ortamı

Kültür besiyeri, mikrobiyal üreme veya kültür elde etmek için laboratuvarda hazırlanan özel besin preparatlarıdır. Bu ortamlar tutarlılık, kompozisyon ve işlev açısından farklılık gösterir. Her laboratuvar, ihtiyaçlarına uygun kültür ortamı türünü hazırlayacaktır.

Bakteriyel kültür toplama

Klinik, çevresel veya endüstriyel öneme sahip bakteri suşlarının toplanması, karakterizasyonu, bakımı ve dağıtımına adanmış kurum veya kuruluşlar vardır.

Bu suşlar, araştırma çalışmaları için ve kültür ortamı üzerinde kalite kontrolleri yapmak için kullanılır.

Örnek: Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu, Venezuela Mikroorganizma Toplama Merkezi (CVCM) ve Küba Ulusal Hijyen, Epidemiyoloji ve Mikrobiyoloji Enstitüsü (INHEM) türleri ve diğerleri.

Referanslar

1. Benavides G, Hermida A. Cruz Verde ve Guasca páramos topraklarından doğal bakteri florasının izolasyonu ve tanımlanması. (Cundinamarca). 2008. Bogota. Şu adresten ulaşılabilir: javeriana.edu.co/biblos
2. Hans S. Genel Mikrobiyoloji. Omega sürümleri. 1991. Barselona, ​​İspanya. Mevcut: biolprocariotas.files
3. Weng Z, Junco R, Díaz R.Mikrobiyal kültürlerin koleksiyonu: Gelişimleri üzerine notlar. Rev Cubana Hig Epidemiol, 2003; 41 (1). Şu adresten ulaşılabilir: scielo.sld.cu/scielo.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.