KAN YAYMASI: ÖZELLIKLERI, TÜRLERI, TEKNIKLERI VE HISTOLOJI - BIYOLOJI - 2025

Yayma kan a, periferal kan yayma kan dolaşımı içinde mevcut bileşenler analiz etmek için kullanılır. Kan yaymasının gözlemlenmesi, birçok patolojinin tanı ve takibinde çok yararlı olan hematolojik veriler sağlar.

Kan yayması, farklı tipte beyaz kan hücrelerinin sayısını (lökosit formülü) ölçmeyi ve ayrıca eritrositlerin, lökositlerin ve trombositlerin morfolojisini ve şeklini analiz etmeyi mümkün kılar.

Kan yaymasının hazırlanması. Kaynak: Laboratuvar bardağında kan. Kamu malıPictures.net

İçinde lökositoz veya lökopeni, lenfositoz veya lenfopeni, nötrofili veya nötropeni, trombositoz veya trombositopeniler ve eozinofili gibi hücre sayısındaki anormallikler tespit edilebilir. Hücre boyutu ve şekil anormallikleri de görülebilir.

Ek olarak, çeşitli anemiler, lösemiler ve bakteriyel veya kan parazit enfeksiyonlarını tespit etmek mümkündür.

Bunun için çalışmanın amacına bağlı olarak gerçekleştirilen çeşitli smear türleri vardır. İnce lekeler ve kalın lekeler var. Bu lekeler uygulama tekniği ve çalışmanın amacı açısından farklılık gösterir.

İnce damlalar, hematolojiyi tamamlamak için yardımcı olarak kullanılır. Bu, kanı oluşturan üç hücre serisinin şekli ve morfolojisinin analizine ek olarak lökosit formülü hakkında veri sağlar: kırmızı seriler, beyaz seriler ve trombositler. Yine de kalın kan filmi çalışmasına bir tamamlayıcı görevi görürler.

Kalın film, sıtma veya sıtma, toksoplazmoz, leishmaniasis, Chagas hastalığı, babesiosis ve mikrofilariasis gibi hemoparazitlerin neden olduğu hastalıkların teşhisinde kullanılır.

Kan yaymasının özellikleri

İyi bir kan yayması belirli özellikleri karşılamalıdır. Bunların arasında şunları söyleyebiliriz:

- Örnek, temsili olması için minimum kalite gereksinimlerini karşılamalıdır.

-Örnekleme iyi uygulanmalıdır.

-Smear'ın zamanında uygulanması.

-Venöz kan ile yapıldıysa, smear yapmadan önce hücreleri deforme etmeyen ve tüpü karıştırmayan bir antikoagülan kullanın.

-Kılcal damar ile yapılmışsa ilk damlayı atın.

- Yayılma homojen olmalıdır. Bu, hücrelerin eşit olarak dağılmasını ve kan hücrelerinin şekil ve sayı açısından iyi analiz edilebilmesini sağlar.

-Smearın kenarları baştan sona düzgün olmalıdır.

- Smear, slaytın kenarlarına 1 ila 2 mm'lik bir kenar boşluğuna uymalıdır.

-Smear tabakasının kalınlığı başından sonuna kadar kademeli olarak azalmalıdır (slayt yöntemi ile ince bir damla ile sürün).

-Numune karışıklığını önlemek için uygun şekilde etiketlenmelidir.

-Kan elementlerinin net bir şekilde gözlemlenmesi için uygun şekilde düzeltin ve boyayın.

Hazırlığı mikroskop altına yerleştirmeden önce smearın iyice kurumasını bekleyin. Daldırma yağını ıslak bir smear üzerine yerleştirmek, hücrelerin görünmesini engelleyen misellerin oluşumuna neden olacaktır.

Kan yayma türleri

Periferik kan yaymaları, ince yayma ve kalın yayma olarak sınıflandırılabilir. İnce tabakalı olanlar, lökosit formülünün incelenmesi ve kan hücrelerinin morfolojik gözlemi için kullanılır. Borrelia gibi hücre dışı bakteriler ve diğerlerinin yanı sıra plazmodyum gibi hücre içi hemoparazitler de görülebilir.

İnce damlada, parazitin türleri belirlenebilir, bu nedenle, kalın damladan daha spesifik bir tekniktir, ancak kalın damla daha hassastır, çünkü hücre dışı hemoparazitlerin kapsamlı araştırması için kullanılan bir konsantrasyon tekniğidir.

İki tür ince damla smear vardır: slaytlar üzerinde gerçekleştirilenler ve lameller üzerinde gerçekleştirilenler. Kalın smearlar slaytlar üzerinde yapılır.

Kan örneği alma teknikleri

Kan yaymaları, kapiller bir delikten veya antikoagülan ile alınan bir venöz numuneden yapılabilir. Antikoagülanlı kandan yapılıyorsa, smear numune alındıktan sonra 2 saate kadar hazırlanabilir.

Kan hücrelerini deforme etmeyen antikoagülanların kullanımına dikkat edilmelidir. En iyi seçenek EDTA'dır. Aksine trisodyum sitrat gibi antikoagülanların kullanımından kaçınılmalıdır.

Örnek kapiler ponksiyonla alınmışsa, smear kan pıhtılaşmadan hemen uzatılmalıdır.

İlk damla atılmalı ve numunenin doku sıvısı ile seyreltilmesini önlemek için bir sonraki damlanın kendiliğinden çıkmasına izin verilmelidir. Kanda hiçbir katkı maddesi bulunmadığından hücre morfolojisinin gözlemlenmesi için en çok tavsiye edilen tekniktir.

Hemoparazitlerin gözlemlenmesi için Solari ve arkadaşları, araştırma çalışmalarında her iki tekniğin (damar delinmesi ve kapiller) eşit derecede etkili olduğu sonucuna varmışlardır.

Kan örnekleme türleri: A. Kılcal damar delinmesi. B. Venöz delinme. Kaynak: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Kan yayması hazırlama teknikleri

Kan yayması, mikroskop lamları veya lamel veya lam üzerinde manuel olarak gerçekleştirilebilir. Otomatik ekipmanla da mümkündür.

-Slides lekeleri

Kolay kullanımı nedeniyle çoğu laboratuvar tarafından tercih edilen tekniktir.

Bir Pastör pipeti kullanarak, temiz bir slaydın bir ucunun ortasına çok kalın olmayan veya çok ince bir kan damlası yerleştirin.

Smear, zemin uçlu başka bir slayt yardımı ile yapılır. Buzlu cam sürgü, damlanın bulunduğu yerin karşı ucuna dik olarak yerleştirilir.

30 - 45 ° arasında bir açıya eğilir ve damlaya doğru kayar; Dokunulduğunda, zemin kızağının kenarı üzerinde doğrusal olarak genişler ve sabit ve tanımlanmış bir hareketle tabaka geri döner; sona ulaşmadan önce slayt kaldırılır.

Bu şekilde, alıcı slaydın yüzeyine homojen bir katman yayılır.

Smear kurumaya bırakılır. Daha sonra sabitlenir ve tercih edilen leke ile boyanır. Mikroskop altında incelemeden önce iyice kurumasını bekleyin. Smearı gösteren yüze bir damla yağ damlatılır ve ışık mikroskobu altında gözlenir.

Slayt üzerine kan yayması. Üstteki resim: lekesiz leke. Alttaki resim: lekeli leke. Kaynak: Coinmac

Slaytlar üzerinde yapılan leke parçaları

Bu smear türünde üç tanımlı alan ayırt edilebilir: baş, gövde ve kuyruk. Baş, smearın başladığı bölgeye karşılık gelir, en kalın bölgedir ve gözlemlenmesi iyi değildir.

Vücut, smearın merkezi veya orta kısmıdır, mikroskop altında gözlemlenecek en iyi alandır, çünkü orada hücreler eşit olarak dağılmıştır ve morfolojisi korunur.

Kuyruk, smearın son kısmına karşılık gelir; burada dağılım artık tekdüze değildir ve eritrosit morfolojisi kaybolma eğilimindedir.

Slayt tekniğinde kalite kontrol

Bu teknikte temel bir rol oynar:

-Samın temizlenmesi ve yağdan arındırılması: Numunenin iyi kaymasını garanti eder.

-Damlanın boyutu: Çok büyük damlalarla daha kalın ve daha uzun bir leke elde edilir, çok küçük bir damla ile yayılma daha kısa ve aşırı derecede ince olur.

-Uzantıda uygulanan hız: smear hız ne kadar düşükse, hız o kadar kalın olur.

- Uygulama açısı: Açı ne kadar küçükse leke ne kadar ince olursa, açı o kadar kalın olur.

-Lamel üzerine adım

Kırılgan lamellerin kullanımı zahmetli olduğu için yaygın olarak kullanılmamaktadır, ancak smear boyunca daha iyi bir hücre dağılımı elde edildiğinden büyük avantajlar sunmaktadır.

Bir lamel ortasına çok kalın olmayan, çok ince olmayan bir damla yerleştirilir. Hemen bunun üzerine, her iki lamelin uçları çıkıntı yaparak bir yıldız oluşturacak şekilde başka bir lamel yerleştirilir.

Damla, kendiliğinden her iki lamel yüzeyine yayılacaktır. Uzatma işleminin sonunda, her bir sürgü hızlı bir şekilde birbirinin karşı tarafına (biri sağa ve diğeri sola) kaydırılır.

Teknik, bir yerine iki smear sağlar.

Yayılmış tarafı yukarı bakacak şekilde kurumaya yerleştirilirler. Kuruduktan sonra tercih edilen teknikle sabitlenir ve boyanır. Bırak kurusun. Bir mikroskop lamı üzerine bir damla daldırma yağı yerleştirilir, smear smear tarafı aşağı bakacak şekilde yerleştirilir ve mikroskop altında incelenir.

Lamel tekniğinde kalite kontrol

Bu teknik için iyi bir smear elde etmek için aşağıdakiler önemlidir:

-Lamellerin temizlenmesi (numunenin düzgün kaymasına yardımcı olur).

-Damlanın boyutu (smear kalınlığını etkiler).

-Lamellerin ayrılma hızı (yayılmanın homojenliğini etkiler).

-Otomatik ekipman ile

Şu takımlardan herhangi biri aracılığıyla yapılabilir: Spinner ve Autoslide.

Spinner, özel bir santrifüj plakasına bir damla kan içeren bir slayt yerleştirmekten oluşur. Numune yüksek hızlarda santrifüjlenir; bu şekilde homojen ve ince bir numune lekesi oluşur. Numunenin hemoliz olasılığı dezavantajına sahiptir.

Autoslide, slaytlar üzerindeki smearın uygulanması için hareketleri mekanik olarak gerçekleştiren bir araçtır. Ayrıca lekeyi düzeltebilir ve lekeleyebilirsiniz. Hatta bazı otomatik hematoloji sayaçlarına da uyarlanabilir.

Kalın smear tekniği

Hemoparazitleri aramak için, iki smear önerilir: biri ince, diğeri kalın damla.

Bir kılcal ponksiyon yapın, ilk damlayı temizleyin. Bir slayta ince bir damla koyun ve daha önce açıklandığı gibi sürün. Kalın boncuk için başka bir slayta büyük bir boncuk yerleştirin ve 1.55 mm'lik bir kareye yayın. İki lekenin kurumasını bekleyin.

Smear boyama

Giemsa veya Wright lekeleri, diğerlerinin yanı sıra, ince damlalar için kullanılabilir. Giemsa veya May-Grunwald Giemsa boyası kalın yaymalar için önerilir.

Giemsa lekesi

Smear 3 dakika metanol ile sabitlenir, süzülür ve tekrar kurumaya bırakılır. Smear daha sonra 10-15 dakika Giemsa boyası ile kapatılır. Damıtılmış su ile yıkanır ve kurumaya bırakılır. Mikroskop altında gözlemlemek için bir damla daldırma yağı damlatılır.

Wright'ın lekesi

Smear 5 dakika süreyle Wright boyası ile kapatılır. Tampon çözeltisini atın ve 6 dakika boyunca pH 6.8'e yerleştirin. Homojenleştirmek için preparatı üfleyin. Distile su ile yıkayın ve kurumaya bırakın. Mikroskop altında gözlemleyin.

Kusurlu smear türleri

Kaydırmalı ince damla tekniğinde kursiyerlerde oluşur.

Farklı kalınlıktaki alanlara sahip lekeler (ince ve kalın serpiştirilmiş)

Bunun nedeni, uygulanan hareketin yayılma sırasında sabit olmaması, durması ve yeniden başlatılmasıdır.

Çok kısa smear smear

Bunun 2 nedeni vardır: Birincisi, kaydırağın diğer ucuna ulaşmadan önce zemin kaydırmasının kaldırılmış olmasıdır. Bu durumda son derece kalın ve kısadır.

Öte yandan smear kısa ama ince ise damla boyutunun çok küçük olmasıdır.

Lekenin sonuna doğru eğimli bir alanla lekeleyin

Bunun birkaç nedeni vardır: Birincisi, zemin kenarının bozuk olması, yayılma sırasında alıcı sürgüye uygulanan basıncın artması veya sürgünün zemin kenarının aşınmasıdır.

Vakuol oluşumu veya net yuvarlak veya eliptik alanlar ile leke

Yağlı lekelerin kullanılmasından kaynaklanmaktadır (kötü yıkanmış ve yağdan arındırılmış).

Çok kalın veya çok ince lekeler

Çok büyük damlalar baştan sona çok kalın lekeler oluşturacak ve çok küçük damlalar çok ince lekeler oluşturacaktır.

histoloji

Kan hücreleri, kan yaymasında görülebilir. Aralarında:

Eritrositler veya kırmızı kan hücreleri

İnsan kanı, eritrositler veya kırmızı kan hücreleri ve iki beyaz kan hücresi. Viascos'tan alınmış ve düzenlenmiştir Gözlemleriniz son derece önemlidir. Bu düzeyde anemi, talasemi, kemik iliği hastalığı vb. Tespit edilebilir.

Erkeklerde eritrosit veya kırmızı kan hücrelerinin sayısı yaklaşık olarak 5 x 10 ⁶ mm3 ve kadınlarda 4,5 x 10 ^6'dır . Kırmızı kan hücreleri, merkezi bir fizyolojik solukluk ile çift içbükey diskler şeklindedir. Ayrı ayrı (normal) veya rulet yığınları (anormal) oluşturarak görülebilirler.

Smear ayrıca poikilositoz (çeşitli şekillerde kırmızı kan hücreleri), anizositoz (çeşitli boyutlarda kırmızı kan hücreleri), anizopoikilositoz (çeşitli şekil ve boyutlarda), anizokromi (farklı renkler), eritroblastlar (olgunlaşmamış kırmızı kan hücreleri), mikrositoz (daha küçük kırmızı kan hücreleri) gösterir. ) ve makrositler (daha büyük eritrositler).

Hemoglobin miktarında eksiklik gösterdiklerinde ve merkezi solukluk arttığında hipokromi olduğu söylenir. Normal bir kırmızı seri gözlendiğinde, normositik ve normokromik olarak rapor edilecektir.

Beyaz kan hücreleri veya lökositler

Beyaz kan hücreleri

Normal bir miktar 5,000 ila 10,000 mm arasında ³ . Bulaşıcı süreçlerde, alerjilerde ve lösemide değişime uğrarlar. Kan yaymasında aşağıda açıklanan birkaç tip ayırt edilebilir.

Bölümlenmiş nötrofiller

Toplam lökositlerin% 55-65'ini temsil ederler. 10-15 μm arasındadırlar. Farklı morfolojileri benimseyen parçalı veya loblu bir çekirdeğe sahiptirler, dolayısıyla buna polimorfonükleer denir.

Sitoplazmalarında bol miktarda nötrofilik granül ve bazı azurofiller bulunur. Bakteriyel enfeksiyonlarda artış (nötrofili), viral enfeksiyonlarda azalma (nötropeni).

Pleokaryositoz (hiper segmentli çekirdekler), arklar (olgunlaşmamış hücreler) veya makro-poliçeler (oval şekilli ve büyük) gibi morfolojik anormallikler görülebilir.

Diğer değişiklikler:

-Toksik granülasyonlar

-Pseudo Pelger nötrofiller (çekirdek loblu veya çift loblu değildir).

-Döhle cisimleri: koyu mavi sitoplazmik kapanımlar.

Artmış sitoplazmik bazofili.

-Trasitoplazmik vakuoller.

-Hücresel piknoz (nükleer köprülerin kaybı).

Bölümlenmiş eozinofiller

Toplam beyaz kan hücrelerinin% 1-3'ünü temsil ederler. 9-10 μm boyutlarındadır. Bol miktarda asidofilik sitoplazmik granüllerin ve azurofillerin varlığı ile karakterize edilirler. Çekirdeğinde iki lob bulunur. Alerjilerde ve paraziter kökenli hastalıklarda sayıları artar.

Bölümlenmiş bazofiller

Lökositlerin% 0-1'ini temsil eden son derece nadirdirler. 10-12μm boyutlarındadır. Çekirdek genellikle kenarlarda düzensizdir ve çift kanatlı olabilir, ancak sitoplazmasındaki çok sayıda bazofilik kaba granülasyon nedeniyle gözlenmez. Çok nadiren bazofili görülebilir.

lenfositler

Bazofilik sitoplazmalı, çekirdekli, iyi tanımlanmış, yuvarlak, yoğunlaşmış kromatinli küçük hücrelerdir. Çekirdek hemen hemen tüm hücreyi kapsar. Kan lökositlerinin% 26-40'ını temsil ederler. Viral enfeksiyonlarda (lenfositoz) artar. Reaktif lenfositler görülebilir.

Monositler

Lenfositlerden daha büyük hücreler, daha büyük sitoplazmaya ve daha gevşek, oval kromatin çekirdeklerine sahiptir. 9-12μm ölçerler. Sitoplazma bol miktarda bulunur ve standart boyama teknikleriyle genellikle soluk grimsi mavi görünür. Değişiklikler arasında vakuolasyonlu monositler ve monositoz görülebilir.

-Platelets

1.5-3 μm arasındadırlar. Şekli yuvarlak veya ovaldir. Normal değer 150.000 ila 350.000 trombosit / mm3 arasındadır. Bazı viral enfeksiyonlarda azalabilirler. Çekirdekleri yoktur ve mor renktedirler. Bu seride makro veya mikro trombositler, trombositoz veya trombositopeni ve trombosit parçaları gibi anormallikler görülebilir.

Patolojik unsurlar

Kan parazitleri

Kan yaymalarında sıtma veya sıtmanın (Plasmodium cinsinin parazitleri) etken maddesi gibi hemoparazitler görülebilir. Bu nedenle, otomatik ekipman bu bulguyu kaçırdığı için smearın manuel olarak analiz edilmesi önemlidir.

Bakteriler

Tekrarlayan ateş veya Lyme hastalığı gibi patolojilerde etken ajanı görülebilir. Bu durumda, kan yaymasında Borrelia recurrenti spiroketes ve Borrelia burgdorferi'ye karşılık gelir.

Olgunlaşmamış hücreler

Diğerlerinin yanı sıra lösemilerde, lösemoid reaksiyonlarda ve lökoeritroblastik reaksiyonda ciddi vakalar görülür. Bakteriyel enfeksiyonlarda sola doğru hafif sapmalar olabilir (dolandırıcıların varlığı). Bazı anemilerde de eritroblastlar görülebilir.

Referanslar

1. Kan ve hematopoetik doku. Mevcut: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Melek. Klinik laboratuvar yorumu. 8. Baskı. Editoryal Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos Hesapları A. Sıtma vivax tanısında kalın venöz kan damlasındaki parazitik yoğunlukların akupresür ile karşılaştırılması. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Şu adresten ulaşılabilir: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Yaşlılarda periferik kan yayması çalışmasının önemi. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Mevcut: scielo.sld
5. Grinspan S. Periferik kan yayması çalışması. Sürekli tıp eğitimi. Mevcut: bvs.hn/RMH